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| FAQs>艾德课堂 |
| 004.紫外分光光度法测定蛋白质含量 |
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| 摘要：
考马斯亮兰G250与蛋白质结合，在0－1000ug/ml范围内，于波长595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250与蛋白质结合迅速，结合产物在室温下10分钟内较为稳定，是一种较好的蛋白质定量测定方法。
1. 实验部分
1.1 仪器与试剂：
Labtech UV POWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250；
牛血清蛋白；超纯水。
1.2 试液的制备：
牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备 称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。
考马斯亮兰G250试剂 称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。
2. 结果与讨论
2.1 校正曲线的绘制
准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、 0.08、0.1ml分别加入到6只10ml试管中，然后用超纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度
为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为 A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。
2.2 精密度
配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的相对标准偏差。
表1 精密度测定结果
2.3 稳定性
取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化如下表2。
表2 稳定度测定结果
3. 结论
该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法。
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