DNA甲基化检测

DNA甲基化是最早被发现的修饰途径之一，大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分，它在维持细胞功能，胚胎发育、生长，癌症产生等诸多方面起到重要的作用。 亚硫酸氢盐反应能够使DNA片段中未甲基化的C与亚硫酸氢钠发生反应，C变成U，经PCR扩增，U变T，而甲基化的C不发生反应，保持不变，从而与未甲基化的C区别开来。目前主要的研究方法也是基于亚硫酸氢盐的处理。艾德科技提供甲基化检测有MSP和BSP方法。

DNA的甲基化主要发生在CpG岛，其甲基化的状态主要是通过亚硫酸盐测序的方法来实现的；样本经亚硫氢酸盐处理后，甲基化的胞嘧啶（C）保持不变，但非甲基化的胞嘧 啶被转化成脲嘧啶，因此在利用该处理产物作为模板的PCR产物中，甲基化的胞嘧啶还是胞嘧啶，但非甲基化胞嘧啶变成了胸腺嘧啶，通过测序可以很容易看出目的片断哪些胞嘧啶是甲基化的，哪些没有，而且还可以对甲基化比例作初步分析。

高分辨率溶解（HRM）

高分辨率熔解（High Resolution Melt,HRM）是一种最新的在表观遗传学中检测 CpG 位点的一种新技术，主要是根据DNA序列的长度、GC含量、碱基互补性差异和特定饱和染料可以插入DNA双链中的特性，应用高分辨率的熔解曲线对样品进行分析，其分辨精度可以达到对单个碱基差异的区分。

艾德科技利用罗氏 LightCycler 480平台，对DNA甲基化水平进行HRM检测。HRM技术特别适用于样本量多、检测位点较少的甲基化分析，是不同于基因芯片检测方法（检测位点多，样本少）的高通量方法。同时，也是基因芯片筛选后的多个基因在更多标本中验证的最佳方法。HRM方法操作简单、灵敏高、重复性高、成本低、不受检测位点的局限等优势，将对于遗传学、肿瘤学等方面的研究和临床应用提供更大的帮助。

服务技术优势

服务要求

1.  对客户提供样本进行DNA的分离、纯化。
2. 根据客户提供相关信息进行引物设计、方案设计，引物设计软件为Methyl Primer Express v1.0，扩增片段长度约为100bp。
3. 亚硫酸氢钠处理DNA，并对标准品和样本进行甲基化PCR扩增。

4.运用HRM技术获得特异熔解曲线。

5.结果分析

服务报告内容

1.结果示例(由上到下，依次是：图A，图B，图C和图D)：

 

 

 

 

图A:标准熔解曲线；图B：标准差异曲线；图C：样本熔解曲线；图D：样本差异曲线

从图C和图D中可以判断样本A的甲基化水平接近25%，样本B的甲基化水平接近50%。

2. 案例分析：

MS-HRM技术检测CD14启动子区域甲基化水平差异

表观遗传研究表明哮喘和过敏症的发生可能与宫内环境相关。研究者分析了94例胚胎样本的免疫受体基因CD14的表达水平和启动子区域甲基化水平，通过采用MS-HRM技术对其中36例样本进行半定量的甲基化分析，发现来源于生活在农场的母亲的胚胎的CD14启动子区域甲基化程度明显低于生活在其他环境中。

 

利用MS-HRM对CD14-1和CD14-2启动子区域甲基化状况进行研究的熔解曲线，其中图A和图B 是标准曲线
原文：DNA methylation levels within the CD14 promoter region are lower in placentas of mothers living on a farm. Allergy. 2012 Jul.