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A&D Direct PCR——无需纯化DNA的PCR扩增技术

故名思议，直接PCR方法使PCR可以直接从样本开始，为DNA扩增带来前所未有的便捷。未经DNA纯化而直接使用微量原始样本做模板，为PCR实验节约大量的时间和成本。

        A&D直接PCR试剂盒与合作单位研发时，所配备的聚合酶是采用特殊工程化的组织裂解液、Protease和2×PCR Easy Mix聚合酶。与其他PCR酶类相比，这两种带有DNA双链结合蛋白的特殊工程化酶具有卓越的性能。组织裂解液、Protease和2×PCR Easy Mix聚合酶非常快速，性能特别强劲，能够耐受未纯化样本中存在的多种PCR抑制剂。基于这些特点，即使在极具挑战性的条件下，组织裂解液、Protease和2×PCR Easy Mix也能够非常可靠地进行DNA扩增——例如直接从样本开始。

        2×PCR Easy Mix聚合酶的卓越性能来自于融合技术。具有校正功能的DNA聚合酶（绿色）与小型双链DNA结合蛋白（紫色）相融合，从而产生了一种独特的聚合酶，这种酶能够以其他任何DNA聚合酶所无法比拟的准确度和速度获得PCR产物。另外，低保真度的2×PCR Easy Mix热启动DNA聚合酶也采用了类似的融合技术，用以获得速度快、性能强劲和抗干扰能力强等方面的优势。

暨推出通用植物总RNA提取试剂盒（A-R3301）成功解决了各种难提植物RNA的问题后，新近又针对高通量植物DNA的提取扩增推出了最新产品——植物直接PCR试剂盒（A-D7501），该试剂盒不需要液氮和研磨杵研磨，也不需要钢珠破碎，更不借助任何特殊的仪器设备，方法及其方便快捷。

众所周知，在正向遗传学的基因定位，植物品质和品种鉴定，或者是植物有效成分检测，以及转基因检测等，都需要高通量植物的DNA提取，然后PCR检测。尤其是在基因图位克隆中，需要构建一个大的群体（少则几千株，多则上万株），然后提取DNA，PCR方法筛选性状的连锁标记（SSR，RAPD等），最后测序克隆基因。传统方法在DNA提取中，都要液氮研磨样品，然后氯仿抽提，最后再PCR。上千株系DNA的提取就需要几周的时间。一些公司进行改进，开发了相对简单些的方法，用96孔吸附板进行提取，完成整个实验也需要大约1个小时；也有些公司在96孔深孔板中加入钢珠或者其他比重大的金属小珠帮助破碎，直接裂解后取上清做PCR，能将时间缩短至半小时，但是需要借助专用的震荡器，而且钢珠的使用成本很高；也有的公司不借助钢珠，而提供小的研磨杵，在PCR管人工研磨后裂解取上清进行PCR，显然耗费的人工时间比较多，而且也容易相互污染。

以上的方法对于大规模的基因或转基因检测显然不理想，不仅时间长而且易污染！国内外很多知名的公司纷纷投入到改进新技术的研发中！A&D Technology Corporation暨推出通用植物总RNA提取试剂盒（A-R3301）成功解决了各种难提植物RNA的问题后，新近又针对高通量植物DNA的提取扩增推出了最新系列产品——植物直接PCR试剂盒（A-D7501），该试剂盒不需要液氮和研磨杵研磨，也不需要钢珠破碎，更不借助任何特殊的仪器设备，方法及其方便快捷。只需截取0.5-0.7厘米的植物叶片放入溶液L中，95℃孵浴10分钟，无需液氮研磨，然后加等体积溶液I，就可以直接进行PCR，方便快捷，是植物领域的科研工作者的最佳选择之一。植物直接PCR试剂盒的特点有：
* 在12 分钟内可以一步提取植物基因组DNA。
* 不需要酚/氯仿抽提。
* 不需要液氮对植物组织进行冰冻、机械处理、纯化或者DNA 的沉淀。
* 含PCR MIX,裂解后取4ul就可以直接PCR。
* 不需要上样缓冲液和染料。
* 提取物在4℃可以保存6周。

实例1：
1、截取1-2片0.5-0.7厘米的水稻叶片放入1.5ml 离心管中，加入100μl溶液L，确保叶片浸没在溶液中。
2、95℃孵育10 分钟，此时DNA已释放但叶片并没有明显的消化。
3、加入100μl溶液I。Vortex混合。直接PCR。
4、PCR反应体系配制：
PCR体系 体积
抽提物 4μl
2×PCR MIX 10μl
上游引物 1μl
下游引物 1μl
水 4 μl
总体积 20μl

5、在PCR仪上进行如下反应：
94℃ 3min
94℃ 0.5-1min
50-65 C 0.5－1min 30-35个循环
72°C 0.5－2min
72°C 10 min
6、8%聚丙烯酰胺胶电泳，银染。

两种简便方案，适用多种需求 ：

1. 直接方案

● 手动操作时间最短
● 可扩增来自液体样本的DNA片段>5kb
● 可扩增来自固体样本的DNA片段最长至1kb
● 可扩增贮存在滤纸片上的样本

     2.    稀释方案
● 可用同一微量样本进行几十次PCR反应
● 可用于长片段或难扩增的片段
● 可将样本进行储存

优势：

● 无需进行昂贵又费时的DNA抽提
● 样品需求量小
● 实验方案简便，手动操作步骤少
● 实验时间极短
● 已对多种样本类型进行测试
● 强劲的热启动DNA聚合酶保证特异性和高产量

目前我们开发成熟并被客户广泛使用的优势产品列下，供您进行选择：

非植物类(动物和血液)直接PCR系列：

植物类直接PCR系列：

Table Tips：

1.A&D直接PCR试剂盒目前均有试用装，数量有限，敬请申请 或发邮件到：tech@aderr.com

2.A&D直接PCR试剂盒可用于直接扩增<1kb的片段，1kb以上的片段，推荐用A&D 基因组DNA系列提取试剂盒，更多点此！