5’RACE Kit 货号：A-P6931
背景资料：本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增cDNA 3′末端全长的试剂盒。对RNA结构进行分析时，一般先通过RT-PCR反应扩增目的区域，然后再对扩增出的目的DNA片段进行克隆、序列分析等。一般的RT-PCR反应很难得到全长的cDNA片段，而RACE法能有效地解决这一问题。Bioteke公司生产的3’RACE试剂盒能够通过已知的cDNA序列，高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的3′末端的全长序列。本试剂盒中含有完成3′-RACE操作的主要试剂。试剂盒中使用的Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无RNase H活性，大大增加了反转录性能。进行3′RACE 实验时，首先由Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）将mRNA反转录成cDNA，然后再使用Bioteke LA Taq，以反转录的cDNA为模板，进行套式PCR反应。3′RACE Adaptor作为反转录引物用于合成1st Strand cDNA；使用基因上游外侧特异性引物1和3′RACE Primer 1进行1st PCR反应。如果1st PCR反应未能得到目的产物，再使用基因上游内侧特异性引物2和3′RACE Primer 2进行2nd PCR反应。PCR产物可以直接进行DNA测序或TA克隆。
进行5′RACE实验时，为提高RACE结果的可信度，应同时M-MLV（-）的负对照实验。M-MLV（-）即：5′RACE Adaptor连接反应后进行RT反应时不添加M-MLV，如果M-MLV（-）的负对照实验没有特异性扩增，说明5′RACE结果来源于mRNA。
同时进行几个样品的反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix），然后再分装到每个反应管中
注意事项：
1.Total RNA使用量是否可以增减？
可以。Total RNA使用2μg 时扩增效果较好，1μg时扩增稍弱。推荐RNA模板使用量为2μg 。
2． RT-PCR反应时何时需要将RNA预变性？
RNA立体结构比较复杂，RNA不预变性时没有得到理想结果时需要将RNA预变性。
3． 5′RACE扩增的电泳结果出现多种条带，为什么？
原因可能是：扩增的基因为多基因家族的成员； 已知序列信息有限，导致PCR扩增特异性差；mRNA 5′端剪切、拼接方式不同。
保存建议：在接收到艾德寄出的试剂盒后请按照说明书建议，使用不同的保存条件或温度来保存试剂盒内组分
定购信息：
| 产品名称 |
规格 |
操作手册 |
货号 |
询价 |
| 5’RACE Kit |
10 次 |
PDF |
A-P6931 |
 |
| Direct-zol™ RNA MiniPrep |
200次 |
PDF |
A-R2052 |
|
| 土壤基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型) |
200次 |
PDF |
A-D4003 |
|
表观遗传学产品全面解决方案列下：
| 产品名称 |
规格 |
操作手册 |
货号 |
询价 |
| DNA羟甲基化定量试剂盒(荧光法) |
48 次 |
PDF |
A-P-1037-48 |
|
| DNA羟甲基化定量试剂盒(荧光法) |
96 次 |
PDF |
A-P-1037-96 |
|
| DNA羟甲基化定量试剂盒(比色法) |
48 次 |
PDF |
A-P-1036-48 |
|
| DNA羟甲基化定量试剂盒(比色法) |
96 次 |
PDF |
A-P-1036-96 |
|
| DNA甲基化定量试剂盒(荧光法) |
48 次 |
PDF |
A-P-1035-48 |
|
| DNA甲基化定量试剂盒(荧光法) |
96 次 |
PDF |
A-P-1035-96 |
|
| DNA甲基化定量试剂盒(比色法) |
48 次 |
PDF |
A-P-1034-48 |
|
| DNA甲基化定量试剂盒(比色法) |
96 次 |
PDF |
A-P-1034-96 |
|
| 通用DNA甲基化定量试剂盒 |
48 次 |
PDF |
A-P-1011-48 |
|
| 通用DNA甲基化定量试剂盒 |
96 次 |
PDF |
A-P-1011-96 |
|
| 超敏DNA甲基化定量试剂盒 |
48 次 |
PDF |
A-P-1021-48 |
|
| 超敏DNA甲基化定量试剂盒 |
96 次 |
PDF |
A-P-1021-96 |
|
| 总DNA甲基化定量试剂盒 |
48 次 |
PDF |
A-P-1014-48 |
|
| 总DNA甲基化定量试剂盒 |
96 次 |
PDF |
A-P-1014-96 |
|
推荐阅读：
关于5-hmC
5-hmC是近年来在动物组织中发现的，由胞嘧啶修饰而来。5-hmC在表观遗传学上的功能可能与5-甲基化胞嘧啶(5-mC)不同。尽管到现在为止还不确知其功能，有研究者猜测它在调控基因的表达与关闭过程中起着重要的作用。5-mC的发现让我们不得不重新评估DNA甲基信息，也不得不监测人类的健康组织和病理组织之间5-mC相对分布的差异。在EPI公司的MethylFlash技术之前，我们还没有发现任何直接的常规方法来检测5- hmC,以及区分5-hmC和5-mC
5-hmC 和 5-mC的区别
时下常用的DNA甲基化分析方法包括限制内切酶酶切和亚硫酸氢盐或MeDIP介导的MS-PCR和测序，这些技术都不适合用来检测5-hmC，因为它与5-mC事实上很难用这类方法区分开来。为了解决这个问题，EPIk研制了MethylFlash羟甲基化DNA定量试剂盒(荧光法)。本试剂盒提供了一种很经济的方法来检测5-羟甲基化胞嘧啶，并且区分5-hmC, 5-mC, 和 C，使得研究者能够重新评估他们的DNA甲基化信息，也能够在新样品中寻找DNA羟甲基化。 |
