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在免疫荧光（Immunofluorescence，IF）实验中，通常会在同一组织细胞标本上同时检测两种抗原，因而进行双重荧光染色（直接法和间接法）。一般来说，直接法简便可靠，但灵敏度较低，而且抗体来源较少；因此，大部分人会选择间接免疫荧光法：先用两种不同种属来源的特异性一抗孵育，再用对应的不同荧光素标记的二抗孵育，从而在荧光显微镜下观测。

在免疫荧光实验中，有时候也需要同时对两个或多个目标蛋白进行共定位。此时，可以选择两个带有不同荧光颜色标记的一抗；然而，在更多的情况下，需要通过两到三种不同种属来源的未标记一抗，再配合两到三种带不同荧光标记的二抗以实现IF 双标或三标。那么该如何选择合适的免疫双标/多标实验的二抗？ 

首先需要考虑荧光颜色的选择

红色和绿色是最常见的两种荧光选择，绿色如FITC、Cy2或新一代Dylight 488等荧光染料；橙色如TRITC、Cy3 等荧光染料，而Texas Red则显示红色，Cy5、Cy7、APC或新一代荧光染料Dylight 649等则提供了深红色显示方案。目前IF双标一般优先选择红色和绿色；如果是三标，则第三种颜色选择蓝色，如AMCA 或者新一代Dylight 350、Dylight 405等。IFkine®系列荧光二抗来自于最新一代的荧光标记基团，在荧光强度、信噪比以及荧光的耐淬灭性上远远由于通用的FITC、TRITC、罗丹明等常规荧光基团的优势，同时具有接近或优于第二代荧光染料Alexa Flour和Dylight的荧光表现。其IFkine® Green提供绿色标记方案，IFkine® Green则是Cy3和罗丹明的卓越替代物，IFkine® Red则为Texas Red提供更优越的红色荧光方案。该系列荧光团具有更高的荧光强度、更低的背景、更佳的抗淬灭性以及优异的性价比。

另外二抗的类型对IF双标/多标也有莫大的影响

在免疫荧光双标或多标时，首先样本本身的复杂条件可能会产生与二抗的非特异性杂交；另外，由于同时有两个一抗分子，因此一抗与二抗之间也有一定的非特异性结合。IFkine®系列荧光二抗经过特别优化，其针对目的种属的特异性非常高，同时针对其他非目的种属的抗体分子的非特异性结合降到最低，同时避免了二抗与样本以及其它一抗的非特异性杂交。

在二抗的种属来源角度，因为需要考虑一抗的不同种属来源，以及免疫荧光封闭血清的选择。二抗的种属与一抗的种属最好有所区别，同时考虑到血清的种属来源要与二抗一致，所以最优的情况是，IF多标实验中二抗的种属来源于非小鼠、非兔、非山羊，而是选择驴、马、鸡等种属来源，并且二抗采用一样的种属来源，这样可以一种来源的血清完成两个抗体的封闭。IFkine®系列荧光二抗均来源于驴，可以配合驴血清进行封闭，效果非常好，在免疫荧光双标以及多标实验中有更出众的表现。IFKine^®系列荧光（IFKine Green、IFKine Orange和IFKine Red）的激发光谱：

作为独特的系列新型荧光抗体产品，IFKine^®具有市场上最高的荧光染色亮度和耐光性，并兼具较少的非特异性杂交和背景，非常适合作为免疫荧光和流式细胞术实验。驴来源二抗以确保在多标使用中的通用型，并且经过特殊处理，其与其它种属来源的蛋白样本或抗体几乎没有交叉反应，因此其在免疫荧光分析的双标以及多标实验中有更出众的表现。我们向您推荐美国Abbkine原装进口的液体形式的小包装IFKine^®系列荧光专用二抗产品，目前推出的产品主要是：

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