适用于从含有杂质的DNA溶液中回收100bp-10kb的DNA。
·10-15分钟(三个步骤)内即可完成DNA的清洁回收。
·最高可以达到95%的回收效率。
·核酸纯化柱无须平衡液处理,可最大吸附10 μg DNA。
·溶液中所含的pH指示剂可直观地判断溶液中DNA与硅胶膜的最适宜结合条件。
·起始样品:酶反应体系或者含有杂质(比如盐份和酚/氯仿残留、糖原或多糖残留、蛋白质残留等)的DNA 溶液。
·可用30-50 μl微量洗脱体积洗脱DNA。
·所需仪器:可适合2ml离心管使用的离心机。
右图:
30 μl 100 bp DNA Marker经Simgen PCR清洁试剂盒清洁后,用30μl Buffer TE洗脱(A,B,C),与未清洁的DNAMarker(50%,100%)对照各个片段的回收效率。
1.5% TAE 琼脂糖凝胶
产品原理:
硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性,所以被分离除去。结合在纯化柱上的DNA经洗涤液洗涤后,即可回收到高纯度的DNA。
操作步骤
在需要清洁的DNA溶液中加入结合缓冲液,混匀后加入到核酸纯化柱中,经过离心步骤使DNA结合到纯化柱上,其他杂质则被过滤出去。经清洗液洗涤一次纯化柱上的DNA后,DNA即可被TE溶液洗脱下来。
适用的分子生物学实验
- DNA测序
- 基因芯片分析
- DNA连接与转化
- 限制性酶切
- 标记
- 微注射
- PCR
- 体外转录
常见问题分析
1. 回收不到DNA或者DNA的回收效率低
可能的原因:
1) Buffer WG或Buffer WB中未加入无水乙醇,应按比例补加无水乙醇。如果是错误地加入了其他试剂,请向我公司技术部寻求帮助。
2) Buffer WG或Buffer WB中错误地加入了70%乙醇。请向我公司技术部寻求帮助。
3) DNA的洗脱效率差。参考第3页柱纯化技术中的第4点“洗脱DNA”内容优化DNA的洗脱方案。
4)将溶液加入到纯化柱前应观察BufferG或Buffer P是否保持着原来的橙黄色,如果溶液变为紫红色,必须加入约10 μl 3 M醋酸钠(pH 5.0)使溶液恢复至原来的橙黄色,否则将严重影响DNA结合到纯化柱上。
仅凝胶回收:
5)制作的凝胶从加样孔至DNA泳动方向呈现为一个降低的斜面,DNA在泳动的过程中大量地流失到电泳缓冲液中。制作琼脂糖凝胶时应注意放平制胶槽,并加入足够量的凝胶液。
6)凝胶没有完全被溶解,DNA仍保留在未溶解的凝胶中。在50°C溶胶时每隔2-3分钟请将离心管漩涡振荡数秒以帮助凝胶彻底溶解。
7)在凝胶溶解后的溶液中加入异丙醇出现雾状沉淀。出现该种现象主要是因为凝胶没有被彻底溶解,此时应注意不要省略后续的Bufffer G的洗涤步骤,并且加入BufferG到纯化柱中后室温静置1分钟,以增强对未溶解的凝胶的洗涤效果。
2. 回收的DNA生物学活性差
1) 回收的DNA中盐分残留量过高。向纯化柱中加入BuffferWG或者Bufffer WB后,室温静置5分钟后再离心,可最大程度地洗去纯化柱上残留的盐分。
2) 回收的DNA中乙醇残留量过高。注意不可省略高速空离(14000 rpm 离心1分钟)步骤。
产品序号:2101050 / 2101250
规格 |
价格 |
50次制备 |
150 |
250次制备 |
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