Western Blot

    免疫印迹immunoblotting又称蛋白质印迹western blot，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western blot常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。  
    艾德科技为您提供标准western blot技术服务（您需自备一抗）。并对band进行灰度分析，得出蛋白表达相对定量结果。

服务要求

    需新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白粗提液，阳性对照样品（如果有）， 检测目的蛋白的一抗（或由艾德科技代购）。组织样品不少于50mg；细胞不少于5×106个；总蛋白浓度不低于 2μg/μl（至少50μl）。

服务基本流程

    1. 蛋白提取和定量（如果提供蛋白样品，则直接电泳预实验检测抗体特异性）；
    2. SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；
    3. 转膜（PVDF膜）；
    4. 封闭 （5%脱脂奶粉）；
    5. 一抗孵育（其中内参基因为Tubulin或HistoneH3.1）；
    6. 二抗孵育（如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续，则收相关预实验费用）；
    7. 显色（ECL）；
    8. 曝光、洗片、灰度分析；

服务报告内容

    蛋白浓度，胶片，膜，以及灰度分析（如果需要）及实验报告

IP 和Co-IP

    免疫沉淀是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与Protein A／G或二抗偶联的agaose或Sepharose beads孵育，通过离心得到beads－protein A／G或二抗－抗体－目的蛋白复合物，沉淀经洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸5－10 min，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。 
    免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

服务要求

    提供新鲜样本材料和IP及WB的一抗（或艾德科技代购）
注：免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。

服务基本流程

    1. 裂解样品，准备蛋白样品；
    2. 准备抗体-Protein A/G beads；
    3. 样品，抗体-Protein A/G bends共孵育；
    4. 洗脱；
    5. WB检测。 

服务报告内容

    WB胶片，PVDF膜，和实验报告。

服务编号	服务项目	内容说明	价格	周期
DTS01	蛋白抽提	总蛋白	￥60/样品	1周
DTS02		核浆蛋白分开	￥120/样品
DTS03	蛋白定量	提供蛋白测定总蛋白浓度	￥50/样品	1周
DTS04	Western Blot预实验	Western Blot 检测一抗体特异性	￥500/目的蛋白	1周
DTS05	Western Blot	Western Blot 标准服务(包括蛋白质提取和定量，Tubulin标定，不含一抗）	￥1500/目的蛋白·膜	2-3周＃
DTS06	SDS-PAGE	客户提供蛋白样品	￥200/组	1-2周
DTS07	IP	提供蛋白样品，做IP和一个WB检测	￥6000/蛋白	3-4周
DTS08	Co-IP	提供蛋白样品，做Co-IP和2个WB检测	￥7000/蛋白	3-4周